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我们饶有兴趣地阅读了左先生发表的文章等，强调了在新冠病毒-19感染活跃期和恢复期粪便样本中存在SARS-CoV-2 RNA。1.然而，没有研究报道在恢复期胃肠道和肝器官内存在病毒抗原。
采用常规免疫组织化学方法，我们检测了结肠、阑尾、回肠、痔疮、肝脏、胆囊和淋巴结中的SARS-CoV-2核衣壳蛋白（NP）(图1 a - k)，这5名COVID-19患者在SARS-CoV-2检测呈阴性后9至180天内康复(在线补充表1）.值得注意的是，当从一个患者(患者1和4)获得多个组织时，所有组织都显示存在病毒抗原，表明病毒感染广泛涉及多器官。有趣的是，对于结肠，病毒抗原只存在于正常的结肠隐窝和息肉中，而不存在于肿瘤组织中(图1问）.在肝细胞癌肿瘤区域也观察到类似的阴性染色(图1 r)，但部分分散免疫细胞呈阳性染色(图1 d）.为了验证我们的发现，我们检测到了SARS-CoV-2刺突蛋白(图1帮)和RNA(图2 b-f)，分别用常规免疫组化和RNAscope检测。然而，我们无法在一些患者的组织中检测到病毒RNA (在线补充表1)，这可能是因为与蛋白质和其他患者依赖因素(如疾病严重程度、恢复时间和基础代谢率)相比，RNA降解率更高。
肠、肝组织SARS-CoV-2核衣壳和刺突蛋白免疫组化染色。(A和B)结肠隐窝(A)和阑尾(B) SARS-CoV-2核衣壳蛋白(NP)阳性，均为颗粒状核上质。(C)痔组织散在免疫细胞SARS-CoV-2 NP阳性(红色箭头)。(D)肝窦状枯否细胞SARS-CoV-2 NP阳性(红色箭头)。(E-H)结肠、阑尾、痔疮和肝脏组织中SARS-CoV-2 NP阴性的代表性图像，摘自无COVID-19病史的个体。(一)淋巴结内散在免疫细胞SARS-CoV-2 NP阳性。(J和K)回肠(J)和胆囊(K) SARS-CoV-2 NP阳性，均为颗粒状核上胞浆型。(L)淋巴结内分散免疫细胞SARS-CoV-2刺突蛋白染色阳性。(M - P)回肠(M)、肝脏(N)、结肠(O)、阑尾(P) SARS-CoV-2刺突蛋白阳性(M - P)。(Q)正常结肠隐窝(右上)SARS-CoV-2 NP阳性(左下红框)。(R)肝细胞癌浸润边缘可见散在的SARS-CoV-2 np阳性免疫细胞，如红色箭头所示。 Hepatocellular carcinoma tumour region, as demarcated by the red box, was negative for SARS-CoV-2 NP. (A–R) Scale bar: 50 µm.
对5例COVID-19患者的组织进行多重免疫组化、RNAscope和流式细胞术分析。(A) DAPI(蓝色)、SARS-CoV2 NP(红色)、ACE2(绿色)和CD68(品红)多重免疫组化染色肝组织的代表性图像。DP1:双阳性细胞1;#TP1和#TP2:分别是三阳性细胞1和细胞2。(B)结肠组织用RNAscope染色DAPI(蓝色)，SARS-CoV-2的代表性图像s基因（红色）、ACE2（绿色）和CD68（洋红）RNA（C-F）代表性RNA显微镜图像，对痔疮（C和D）和回肠（E和F）进行DAPI（蓝色）、SARS-CoV-2染色s基因（红色）和CD68（绿色）。一些SARS-CoV-2阳性细胞的CD68染色呈阳性，如白色箭头所示（D和F）。（G）SARS-CoV-2特异性CD4+从CD45中鉴定出T细胞+CD3+CD4+CD39+CD103+CD38+Granzyme B+CD39、CD103和CD38选择具有记忆表型的免疫细胞，8 9颗粒酶B选择具有功能表型的免疫细胞。10CD38的代表性伪彩色图+Granzyme B+CD4+患者1的组织和血液样本中的SARS-CoV-2肽对健康供体血液进行刺激后的T细胞。从患者2获得了类似的结果。数字表示绘制门的百分比。显示的图代表至少两个独立实验。（A–F）比例尺：100 µm。
此外，多重免疫组化和RNAscope染色显示，部分sars - cov -2阳性细胞在结肠和肝脏中与ACE2受体和CD68共定位(图2A，B）.这些细胞很可能是单核细胞系和肝脏内的正弦库普弗细胞，因此证实了我们之前基于细胞形态的推测。这表明SARS-CoV-2确实可能像之前报道的那样直接感染这些免疫细胞。２ ３最后，在检测和验证组织中的病毒抗原时，我们询问组织是否对病毒有免疫反应。我们进行了体外肽刺激试验，其中血液和组织与病毒核衣壳蛋白、棘突蛋白和膜蛋白的混合物孵育，然后进行流式细胞术分析。N值得注意的是，SARS-CoV-2特异性CD38+Granzyme B+CD4+以与匹配的血液样本相当的方式从组织中分离出T细胞(图2G)，表明sars - cov -2特异性记忆T细胞可能在血液和组织中维持一段时间。但感染前后的组织免疫微环境比较，确认病毒抗原附近的免疫细胞是否确实对SARS-CoV-2具有特异性，仍需进一步研究。
一些研究小组报告了一种现象，即轻度或中度新冠病毒-19感染后康复的患者在鼻咽拭子或痰样本中检测呈阳性，４ ５增加了对残余病毒宿主和康复个体的潜在传播能力的关注。虽然呼吸道传播是大多数COVID-19感染的原因，但越来越多的证据表明COVID-19导致胃肠道和肝脏表现，因为研究报告称，尽管鼻咽部或痰标本检测出病毒阴性，但肛门拭子和粪便样本中SARS-CoV-2 RNA呈阳性。1 4 - 6这些报告与我们对鼻咽拭子阴性患者肠道组织的发现是一致的。此外，尽管鼻咽拭子试验呈阴性，但在已故患者的肺组织中发现了SARS-CoV-2病毒抗原，7.我们的发现是在非死后的恢复期肺外组织中残留病毒的第一个证据，恢复期最长可达6个月。似乎拭子阴性结果不一定表明病毒已从体内完全清除。然而不幸的是，我们无法确定从组织中分离出来的病毒抗原是否具有传染性，因为在组织固定过程中，病毒不可避免地会被破坏。我们也没有获得肛门拭子、粪便样本和病毒隔离设施，这将为粪-口传播的可能性提供进一步的了解。无论如何，基于这些初步发现，我们认为有必要在更大的队列中进行进一步研究，以探索病毒在组织标本中的复制和传染性，并了解COVID-19对胃肠道和肝脏的影响。
伦理语句
伦理批准
本研究由SingHealth中央机构审查委员会批准(参考号:2018/3045和2019/2653)。
补充材料
脚注
CCLC、DG和XL贡献相同。
出席部分工作已在预印本服务器MedRxiv中发布。DOI: 10.1101 / 2020.10.28.20219014
更正通知这篇文章发表在“在线第一”后已被更正。已添加通讯作者。
贡献者概念、设计和监督：JY和KHL。文章起草：CCLC、DG、XL和JY。提供患者信息：ZEAT、WYW、PCC、CYC、YXK、TTT、SK、WMDT和JG-HL。组织学相关技术协助：TZT、JCTL、JNL和BT。执行RT-PCR实验：EXC。进行流式细胞术实验：XL。生成图s:CCLC、DG、XL和SNN。从病理学角度提供科学输入：SL。所有作者均已阅读并同意手稿的出版版本。
基金提交人获得了新加坡综合医院中心赠款(第。NMRC/CG/M011/2017_SGH)和A*STAR职业发展奖(202D8226)
竞争利益没有宣布。
出处和同行评审未委托；外部同行审查。
补充材料此内容由作者提供。它没有被审查由BMJ出版集团有限公司(BMJ)和可能没有被同行审查。讨论的任何意见或建议仅仅是作者的那些(s)，并没有被BMJ认可。英国医学杂志否认所有责任和责任从任何信赖放置的内容。如果内容包括任何翻译材料，BMJ不保证翻译的准确性和可靠性(包括但不限于当地法规、临床指南、术语、药品名称和药物剂量)，并且不负责因翻译和改编或其他原因而产生的任何错误和/或遗漏。
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